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ELISA试剂盒:温育可不是你想的那么简单!
发布时间:2019-04-22   点击次数:138次

温育是ELISA测定中影响测定胜败zui为要害的一个要素。也是zui简略出现问题的一个过程。通常目前国内ELISA产品试剂盒的反应温育时间为37 ℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37 ℃ 1~2小时才华有较完全的结合,低于1小时,或许会影响测定下限。因此,关于温育,在实践测定操作中必定要留意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有满意的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需求必定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间或许还比较长,而在临床实验室中,很少有人留意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开端计时,这样就很简略构成实践测定中温育时间不行,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南边的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬天总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床查验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这或许就与南边冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37 ℃温育时间不行,致使弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37 ℃下满意的温育时间,临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需求多长时间孔内温度才华达到37 ℃,然后恰当延伸板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的挑选。在有的ELISA试剂盒的阐明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37 ℃下1小时,另一种则为43 ℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的实质来看,在较低的温度下反应较长的时间zui为完全。如2~8 ℃下反应24小时。较高的反应温度,因为分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的或许。因此,咱们主张在临床ELISA测定中尽量运用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的打扫。曾经在运用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,发生这种“边缘效应”的原因或许为 96孔板周孔与中心孔外表或热力学特征的不同。但有研讨证实在温育中的热力学梯度或许是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的惯例 ELISA测定中,将板从室温(通常在25 ℃左右)置于37 ℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间或许存在一热力学梯度。因此运用水浴或在将反应溶液参加至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37 ℃),就可以很简略地打扫“边缘效应”,而且可进步测定的重复性。
                             
    总而言之,在ELISA测定中,要保证好的测定效果,可选用上述简略方法来保证温育条件,即尽量选用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37 ℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度敏捷与温室平衡。

 

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